技術文章
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細胞培養的緩沖體系
2010-04-06細胞培養的緩沖體系用于細胞培養的緩沖鹽溶液主要分為兩種類型：一種是在大氣條件下用于平衡的緩沖鹽溶液，另一種是當氣相中含有5-10%的二氧化碳時用于平衡的緩沖鹽溶液。由于含有Hank緩沖鹽的培養基的磷酸pKa值近于生理pH值，因此適于大氣條件下的平衡。這些培養基含有適于羧化作用和類似生物過程的碳酸氫根離子。在二氧化碳培養箱中使用Hank緩沖鹽會導致培養基的pH...
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點突變的相關基因型
2010-03-29點突變相關的基因型mutS（Mutator）功能：mutS基因表達的蛋白具有識別DNA上錯配序列的功能，并能修復其錯配序列（GC→AT），防止基因突變。mutS基因的變異導致DNA的錯配序列不能得到修復，容易發生基因突變，這對于利用點突變進行基因改造是有利的。dut（dUTPase）功能：dut基因表達脫氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶（dUTPase），它能水解...
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甲基化相關的基因型
2010-03-29甲基化相關的基因型dam（DNAadeninemethylase）功能：dam基因表達DNA腺嘌呤甲基化酶，它能催化特異序列GATC中A的甲基化，保證DNA免受限制性核酸內切酶MboI的切斷，同時在DNA復制時也起一定的輔助作用。dam基因的變異導致腺嘌呤（A）甲基化酶活性的缺失，使腺嘌呤（A）不被甲基化，易于獲得非甲基化質粒。dcm（DNAcytosine...
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基因重組相關的基因型
2010-03-29基因重組相關的基因型recA（Recombination）功能：recA基因表達ATP依賴型DNA重組酶，它在λ噬菌體與基因組DNA的溶原重組時起作用，同時具有對DNA放射性損傷的修復功能。由recA基因的變異所產生的基因型使同源或異源DNA的重組不能進行，保持插入DNA的穩定性，對DNA的轉化有利。一個菌株的基因型如果是recA，則說明此菌株的表現型是重組...
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Northern blot技術
2010-03-24Northernblot技術經乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳，因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環以避免電泳過程中形成過高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMS...
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植物組織RNA提取
2010-03-24植物組織RNA提取的難點及對策從植物組織中提取RNA是進行植物分子生物學方面研究的必要前提。要進行Northern雜交分析，純化mRNA以用于體外翻譯或建立cDNA文庫，RT-PCR及差示分析等分子生物學研究，都需要高質量的RNA。因此，從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA是順利進行上述研究的關鍵所在。a）*Y（WL從文獻報道上看，有許多植物就是由于未能...
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復蘇方法
2010-03-15復蘇方法1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，再補加10ml培養液，吹打使細胞懸浮。4．低速離心（500～...
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蛋白質提取的方法
2010-03-15蛋白質提取的方法總匯1、植物組織蛋白質提取方法1、根據樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據材料不同適當加入），準備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，樣品制備完成。蛋白質提取液：300ml1、1Mtri...
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幾種常用轉化細胞的轉化
2010-03-15幾種常用轉化細胞和轉化技術1）致癌化學物轉化細胞：轉化敘利亞地鼠胚胎細胞實驗1．取材：妊娠后第13天取材，取數個同窩胚胎，去頭和內臟，在無菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘，濾過、低速離心、吸除消化液、加入營養液、制備成細胞懸液、接種入75cm/培養瓶中，接種密度10～20×106/75cm，37℃培養2...
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如何提高RT-PCR反應體系的靈敏度
2010-03-10如何提高RT-PCR反應體系的靈敏度：1、分離高質量RNA成功的cDNA合成來自高質量的RNA。高質量的RNA應保證全長并且不含逆轉錄酶的抑制劑如EDTA或SDS等，以及盡可能減少基因組DNA污染。RNA的質量決定了你能夠轉錄到cDNA上的序列信息量的大值。2、使用無RNaseH活性的逆轉錄酶在逆轉錄反應中經常加入RNase抑制劑以增加cDNA合成的長度和產...
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影響質粒提取的因素
2010-03-08影響質粒提取的因素：質粒提取的得率和質量與很多因素有關，如宿主菌的種類和培養條件、細胞的裂解、質粒拷貝數、質粒的穩定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。宿主菌種類質粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中，多數情況下我們是從大腸桿菌中提取質粒。大腸桿菌的菌株不同會影響質粒提取的質量。從宿主菌如DH5α和*0中可以得到高質量的質粒DNA。HBl01和它的衍生菌株，如TG...
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質粒提取原理及流程
2010-03-08質粒提取原理及流程：較常用的質粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑（如Triton和SDS）裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質粒（15kb）。堿裂解法是一種應用為廣泛的制備質粒DNA的方法，其原理為：染色體DNA比質粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分子，而質粒DNA為共價閉合環狀分子；當用堿處理DNA溶液時，線狀染色體DNA容易發...
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質粒DNA分離和純化
2010-03-08質粒DNA分離和純化：純化要求質粒DNA中不應存在對后續實驗中的酶活性有抑制作用的有機溶劑分子或過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質、多糖、脂類、基因組和RNA的污染。不同的后續實驗對于質粒純度的要求不同，常規的分子生物學實驗（如酶切、測序等）普通純度的質粒即可滿足實驗，而對于轉染實驗，要求質粒的純度較高（如高純度或無內毒素）。可以選擇不同的質粒提...
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Lowry法蛋白濃度測定
2010-02-27Lowry法蛋白濃度測定目錄號規格價格PC0030-10001000T280.00產品簡介：Lowry法包括兩步反應：*步是在堿性條件下，蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物；第二步是此絡合物將Folin試劑還原，產生深藍色，顏色深淺與蛋白質含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質。Folin試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有...
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BCA蛋白濃度測定
2010-02-27BCA蛋白濃度測定目錄號規格價格PC0020-500500T280.00產品簡介：Bicinchoninicacid（BCA）法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎上改進而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環境下蛋白質與Cu2+絡合并將Cu2+還原成Cu+。兩分子BCA與一個Cu+螯合形成穩定的紫藍色復合物，在562nm處有高的光吸...